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如何利用液氮將菌種在-80℃低溫冷凍保藏

發(fā)布時(shí)間:2019-11-05 11:37:05 瀏覽:1775次

將菌種保藏在-80 ℃冰箱中以減緩細(xì)胞的生理活動進(jìn)行冷凍的一種保藏方法。液氮罐廠家分享其操作步驟如下:

*先做好安瓿管的準(zhǔn)備

安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí),先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標(biāo)簽,標(biāo)上菌號及時(shí)間,加入脫脂棉塞后,121 ℃下高壓滅菌(15~20) min,備用。

如何利用液氮將菌種在-80℃低溫冷凍保藏

其次要做好保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備

保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí),應(yīng)注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100 ℃間歇煮沸2~3次,每次(10~30) min,備用。

之后注重微生物保藏物的準(zhǔn)備

在*適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進(jìn)行純度檢查后與保護(hù)劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于(108-1010)個/mL為宜(以大腸桿菌(Escherichia coli)為例,為了取得每毫升1010個活細(xì)胞菌液2 mL~2.5 mL,只需10 mL瓊脂斜面兩支)。

采用較長的毛細(xì)滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約(0.1~0.2) mL,若是球形安瓿管,裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短,*好在(1~2) mL內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時(shí)應(yīng)注意在無菌條件下操作。

接著進(jìn)行凍結(jié)保藏

將安瓿管或塑料凍存管置于-80 ℃環(huán)境中保藏。

*后,咱們還得知道,冷藏后如果要取出使用的復(fù)蘇方法。從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管,應(yīng)立即放置38 ℃~40 ℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)快速搖動。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止,約需50 s~100 s。開啟安瓿管或塑料凍存管,將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。